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植物游离氨基酸(FAA)ELISA试剂盒实验原理及样本处理要求

点击次数:744   发布时间:2019/9/11 15:52:45

植物游离氨基酸FAAELISA试剂盒实验原理及样本处理要求
 
 
植物游离氨基酸(FAA)ELISA试剂盒实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包植物游离氨基酸FAA)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物游离氨基酸FAA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
 
植物游离氨基酸(FAA)ELISA试剂盒样本处理及要求
1.  血清将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20或-80保存,但应避免反复冻融。
2.  血浆用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20或-80保存,但应避免反复冻融。
3.  组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。*后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
4.  细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响*后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
 
 

原创作者:上海臻科生物科技有限公司

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